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天恩泽可调式易错PCR试剂盒

  • 型   号:160903-100
  • 价   格:1900
  • 更新时间:2020-10-30
  • 厂家性质:经销商

天恩泽可调式易错PCR试剂盒 160903-100,产品简介:
产品品牌:天恩泽
产品名称:可调式易错PCR试剂盒
英文名称:Controlled Error-prone PCR Kit
产品货号:160903-100
产品规格:100次
产品价格:1900元

天恩泽可调式易错PCR试剂盒 160903-100

我们北京诺博莱德公司作为天恩泽公司的代理商,先简单介绍一下天恩泽公司:

北京天恩泽公司的目标是研发出技术先进、质量稳定、价格合理的试剂精品。公司的创立宗旨是技术至上、质量至上、服务至上,公司的产品研发团队均为高学历并在海外有长期的科研经验;公司的管理团队领袖已在行业内拥有超过20年管理经验;同样,公司的运营团队也有丰富的执行经验。

北京天恩泽公司充分了解客户的需求,并努力创新以满足客户不断发展的需求。我们将与我们的客户共同成长,成为生物技术领域中zhuoyue产品和服务的jijia提供者。

DNAout、RNAout、Erasol、天净沙、克必隆、归去来、好亦多均为天恩泽基因注册商标(试剂类)。

我们北京诺博莱德科技IGE赛车机器人作为天恩泽公司的代理,为客户提供,正规进口,保证原装正品,货期稳定,折扣好的服务标准。

天恩泽可调式易错PCR试剂盒 160903-100,产品简介:

产品品牌:天恩泽

产品名称:可调式易错PCR试剂盒

英文名称:Controlled Error-prone PCR Kit

产品货号:160903-100

产品规格:100次

产品价格:1900元

运输:低温

保存:-20℃保存

有效期:1年

货期:1-2天

产品介绍:

可调节突变率

天恩泽可调式易错PCR试剂盒 160903-100,产品特点:

  易错PCR(error-prone PCR)是利用Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校对功能的特性,

在一定条件下(如不同的 dNTP 浓度、Mg 浓度和 MnCl2存在)能够按较高的机率引入随机引入突变。如果有适当的选择方法,则可从构建的突变库选出所需突变体。易错 PCR 和常规PCR的比较如下:

 

 

本产品是在本公司的易错 PCR试剂盒基础上改进而得,本产品具有下列特点:

1. 即开即用,十分简单方便,尤其在生物制药和酶学研究领域显示出了它的优越性。

2. 配方经过精心优化,实验人员在一定范围内可以控制突变率,一轮 PCR 的突变率范围在2-8突变/1000bp,更高的突变率可以通过多轮PCR达到。 

3. 可用于连续易错 PCR(sequential error-prone PCR),只需把上一次易错 PCR 的产物用作下一次易错PCR的模板即可,使每一次获得的小突变累积而产生重要的有益突变。 

4. 可以扩增的 DNApian段更长,达到2kb,对于2kb 以上的产物,建议分段扩增。

5. 本试剂盒足够100 次30uL 体系的易错PCR。

本产品是在本公司的易错 PCR试剂盒基础上改进而得,本产品具有下列特点:

1. 即开即用,十分简单方便,尤其在生物制药和酶学研究领域显示出了它的优越性。

2. 配方经过精心优化,实验人员在一定范围内可以控制突变率,一轮 PCR 的突变率范围在2-8突变/1000bp,更高的突变率可以通过多轮PCR达到。 

3. 可用于连续易错 PCR(sequential error-prone PCR),只需把上一次易错 PCR 的产物用作下一次易错PCR的模板即可,使每一次获得的小突变累积而产生重要的有益突变。 

4. 可以扩增的 DNApian段更长,达到2kb,对于2kb 以上的产物,建议分段扩增。

5. 本试剂盒足够100 次30uL 体系的易错PCR。

规格及成分

成  份

编 号

十孔盒包装

易错PCR专用 Taq DNA 聚合酶(5U/uL)

101005c

50 uL(红色盖)

易错PCR Mix 2.0,10×

160903a

300 uL(黄色盖)

易错 PCR专用dNTP 2.0,10×

160903b

300 uL(白色盖)

易错PCR专用MnCl2

160903c

300 uL(紫色盖)

易错PCR专用dGTP

160903d

300 uL(蓝色盖)

超纯水

100935

1 mL(本色盖)

使用手册

160903sc

1 份

运输及保存:低温运输,-20℃保存, 有效期为一年。

自备试剂:引物、DNA模板、常规 PCR 试剂盒。

使用方法:

1。 将引物稀释到10uM。引物也是决定易错 PCR 成败的关键因素,设计引物时要保证其Tm 在 70℃,长度在 25-30nt 之间,GC 含量在45%-60%之间,3 端 GC 含量低,并且没有发夹结构。

2。 用自备易错 PCR 引物和常规 PCR 试剂扩增制备易错 DNA 模板(常规 PCR 产物),胶回收并准确确定浓度。注意:易错 PCR 的模板一定要用胶回收的常规 PCR 产物,因为胶回收会可以把电泳不可见的非特异性扩增片段去除,否则这些片段由于也是用易错 PCR 引物扩增所得,在易错 PCR扩增时也会被扩增,产生竞争抑制,降低靶分子的扩增效率。如果常规PCR制备模板的引物和易错 PCR 引物不同(类似巢式 PCR)则可以避免此问题,但需要合成两对引物。

3。 将回收的 DNApian段(模板)稀释到1ng/uL 、10ng/uL 和100ng/uL三个浓度。注意:模板使用量是影响突变率的最重要因素,模板 DNA 为非突变 DNA,扩增产生的 DNA 为突变 DNA,易错PCR体系最终 DNA 量是基本固定的,因此模板 DNA 使用量越大,则突变 DNA在终产物中的相对比例就越低,突变率就越低。反之亦然。但模板太少又不容易扩增成功,所以建议同时测试两个模板用量。如果都成功,则优先选用模板浓度低的 PCR 产物进行分析。

4. 根据每1000bp的预期突变数按下表确定30uL易错PCR体系中MnCl2和dGTP的用量(这是在模板DNA不超过1ng的前提下的数据)。表中的Mn表示易错PCR专用的MnCl2, dG表示易错 PCR专用的dGTP:

预期突变数

2 个

3 个

4 个

5 个

6 个

7 个

8 个

Mn 用量(uL)

0

1.0

2。5

4.0

4。0

4。0

4.0

dG用量(uL)

0

0

0

1。0

2.0

3.0

4。0

5. shouci次建议设置 3 个模板浓度。在 3 干净的 PCR 管中,分别加入下列成分(这里是设置30uL 的反应体系,如果反应体系不是30 uL,则各成分用量需要按等比例增加或减少) :

成分

模板用量1

模板用量2

模板用量3

易错PCR Mix, 10×

3 uL

3 uL

3 uL

易错PCR专用dNTP, 10×

3 uL

3 uL

3 uL

易错PCR专用MnCl2

根据上步计算

根据上步计算

根据上步计算

易错PCR专用dGTP

根据上步计算

根据上步计算

根据上步计算

自备 DNA 模板

1 uL(1ng/uL)

1 uL(10ng/uL)

1 uL(100ng/uL)

自备 PCR引物 (10 uM each)

1 uL each

1 uL each

1 uL each

易错PCR专用 Taq DNA 聚合酶

0.5 uL

0.5 uL

0.5 uL

超纯水

补水到 30uL

补水到 30uL

补水到 30uL

6. 按已经优化的常规 PCR条件进行易错 PCR:

PCR前变性

94℃ 3 分钟

易错PCR(循环 30-60 次)

94℃ 1 分钟

45℃ 1 分钟

72℃ 1 分钟(对1Kb 长的模板)

注:易错 PCR 一般不需要热启动,也不需要在PCR结束后做延伸处理。长度每增加 1Kb,时间延长1 分钟。易错 PCR 循环次数越多,突变DNA(扩增产物)与非突变 DNA(模板)的比例就越高。此外在突变率和模板长度恒定的情况下,扩增次数越多,发生突变的绝对数就越高,在同一模板上发生的突变位点数就越多,所以shouci次实验时keyi做 30、35、40、45、50、55、60 次7 个循环数的比较。

7. 电泳检测是否得到预计长度的PCR产物。如果没有,可以调整模板用量和 PCR 参数。

8. 胶回收易错 PCR 扩增产物、克隆并对单菌落进行功能筛选或测序分析、如果需要增加突变率,可以以突变后的 DNA 为模板,进行下一轮易错 PCR。

疑难解答

Q:现象:没有 PCR产物。

A:可能原因:一是引物没有优化,可以重新设计引物;二是模板 DNA 太少,可以增加用量;三是模板不纯,keyi先胶回收;四是 DNA 溶液中有 EDTA,可以适当补加Mg++。

Q:现象:太多的 PCR 条带或PCR条带模糊一片。

A:可能原因:一是模板有胶回收、二是 PCR 循环数太多;三是复性温度太低;四是引物没有优化;五是 PCR 条件没优化,可以使用 touch-down PCR。

Q: 如果需要更高的突变率,如何办?

A: 可以使用连续多次易错 PCR 来提高突变率。但先用胶纯化回收易错 PCR片段,再用于下一轮易错 PCR。此外不能用少于千分之一的shouci次易错PCR产物作为第二轮易错PCR的模板,否则多样性将受到影响。第三轮易错 PCR keyi使用所有第二轮的易错 PCR 产物作为模板,但需要在10mL 体系中完成(可以分成很多100uL 体系进行)。

关联产品:易错PCR试剂盒(CAT#:101005-100)

以下是天恩泽品牌部分热销产品,如需其他品牌产品请咨询本店客服:

品牌

产品货号

货品名称

规格

天恩泽

200101-50

第二代病毒采运试剂盒(低敏型)原拭子病毒采运试剂盒,核酸诊断用

50次/盒

天恩泽

200201-50

第三代免提核酸提取病毒采运试剂盒

50次/盒

天恩泽

200601-50

荧光及可视化LAMP试剂盒

50次/盒

天恩泽

200603-50

荧光及可视化RT-LAMP试剂盒

50次/盒

天恩泽

200108-2。5L

xinguan病毒灭活液A型

2.5L/瓶

天恩泽

91103-250

非冻型拭子病毒保存液

250ml/瓶

天恩泽

15-81920

SARS-CoV-2冠状病毒N基因探针法荧光定量RT-PCR试剂盒

50次/盒

天恩泽

16-81920

SARS-CoV-2冠状病毒N基因荧光及可视化RT-LAMP试剂盒

50次/盒

天恩泽

15-23000

African Swine Fever Virus(ASFV)非洲猪瘟病毒探针法荧光定量PCR试剂盒

50次/盒

天恩泽

16-23000

African Swine Fever Virus(ASFV)非洲猪瘟病毒LAMP试剂盒

50次/盒

天恩泽

15-29420

Yersinia pestis鼠疫耶尔森菌(鼠疫杆菌)探针法荧光定量PCR试剂盒

50次/盒

天恩泽

71201-50

柱式动物RNA提取试剂盒

50次/套

天恩泽

71001-50

柱式病毒RNA提取试剂盒

50次/套

天恩泽

60705-50

一管式植物DNA提取试剂盒

50次/套

天恩泽

3070-100

动物RNA提取试剂盒(TRIzol)

100mL/瓶

天恩泽

81027-50

TRIzol伴侣

50次/套

天恩泽

70701-50

柱式病毒DNA提取试剂盒

50次/套

天恩泽

3674-50

一管式病毒DNA提取试剂盒

50次/套

天恩泽

90404-50

柱式植物RNA提取试剂盒2.0

50次/套

天恩泽

60802-50

柱式细菌DNA提取试剂盒

50次/盒

天恩泽

71203-50

柱式植物RNA提取试剂盒

50次/套

天恩泽

60602-50

柱式植物DNA提取试剂盒

50次/套

天恩泽

90315-250

非冻型尿液DNA保存液

250mL/瓶

天恩泽

3660-250

非冻型组织DNA保存液

250mL/瓶

天恩泽

3060-250

非冻型组织RNA保存液

250m/瓶

天恩泽

90805-10

即用型PCR试剂盒3。0

1ml×10/盒

天恩泽

90708-1.5

即用型高保真PCR试剂盒

1.5mL/瓶

天恩泽

90408-1

2X 染料法荧光定量PCR Mix(2x SYBR qPCR Mix)

1ml/管

天恩泽

190303-1

2X 探针法qPCR Mix (TaqMan探针法荧光定量PCR试剂盒)

1ml/管

天恩泽

101005-100

即用型易错PCR试剂盒

100次/套

天恩泽

160903-100

可调式易错PCR试剂盒

100次/套

天恩泽

3090-250

天净沙RNase清除剂A型(原固相RNase清除剂)

250mL/瓶

天恩泽

3091-1。5

天净沙RNase清除剂B型(原液相RNase清除剂)

1.5mL/套

天恩泽

140648-250

PCR污染清除剂

250 mL/瓶

天恩泽

70902-1.5

PCR级甜菜碱溶液,5M

1。5mL/管

天恩泽

100805B-250

Tris饱和酚-lvfang-yiwuchun混合液(DNA提取用)

250ml/瓶

天恩泽

130502-50

无内毒素水

50mL/瓶

天恩泽

160251-250

4%中性甲醛固定液

250mL/瓶

天恩泽

100302-100

包涵体蛋白溶解及复性套装

100次/次

天恩泽

200604

核酸释放剂(DNA-RNA通用型)

300次/盒

天恩泽

61202-10

天净沙核酸释放剂

10mL/瓶

天恩泽

70303-1.5

绿如蓝核酸染料(UV)

1.5mL/管

天恩泽

70503

DNA电泳分子量标准系列

50次/管

天恩泽

小师弟

高压快速电泳预制胶

10块/盒

 

 

 

 

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