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碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)
发布时间:2016-06-14   点击次数:788次

产品简介:

(Alkaline phosphatase,简称ALPAKP)为一类磷酸酯酶,广泛分布于哺乳动物组织内,其活性所需zui适pH9.2~9.8。此酶主要存在于物质交换活跃之处(细胞膜),如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮,还见于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌之细胞膜。

不是采用金属沉淀法来显示碱性磷酸酶活性,而是采用偶氮偶联法(又称同时偶联法),其原理是在pH9.29.8的碱性条件下,细胞内碱性磷酸酶可使AB-BI磷酸盐水解,释放出磷酸不萘酚,后者与偶联重氮盐生成有产物,定位于细胞质中。该染液可用于血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切片、梯度入水后的石蜡切片等的碱性磷酸酶染色,碱性磷酸酶活性部位呈蓝色,位于胞桨,结果较金属盐沉淀法可靠。

产品组成

编号

名称

D2804

4×2ml

D2804

4×10ml

D2804

4×20ml

Storage

试剂(A):ALP固定液

2ml

10ml

20ml

RT避光

试剂(B):

ALP孵育液

B1:AS-BI染色液

1ml

5ml

10ml

-20℃避光

B2:FBB染色液

1ml

5ml

10ml

-20℃避光

临用前,按 B1:B2=1:1 比例混合,即为 ALP 孵育液,即配即用。

试剂(C):核固红染色液

2ml

10ml

20ml

4℃避光

试剂(D):甲基绿染色液

2ml

10ml

20ml

RT避光

使用说明书

1

 

自备材料:

1、载玻片、湿盒

2、显微镜

 

操作步骤(仅供参考)

()、涂片或切片

1、血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切片、石蜡切片入ALP固定液固定3min(梯度入水后的石蜡切片无需固定),水洗。

2、滴加配制好的ALP孵育液,放入湿盒中,避光孵育15~20min,水洗。

3、入核固红染色液或甲基绿染色液复染3~5min。

4、水洗、镜检或甘油明胶封固后镜检。

()贴壁培养细胞

1、取6孔板或其他容器培养的细胞,弃液,PBS清洗干净。

2、加入ALP固定液固定3min或4%多聚甲醛固定10~15min,PBS清洗。

3、滴加配制好的ALP孵育液,放入湿盒中,避光孵育15~20min,PBS清洗。

4、入核固红染色液或甲基绿染色液复染3~5min。

5、PBS 清洗、镜检。

染色结果:

ALP活性部位

蓝色

细胞核

红色(核固红)或绿色(甲基绿)

血液、骨髓涂片结果判断:

一般以积分报告结果,根据 100 个中性粒细胞阳性颗粒进行 0~4+计分

细胞分值

染色特点

0

无颗粒

1

稍有颗粒

2

中等程度颗粒

3

多数颗粒

4

充满颗粒

 

临床意义:

1、类白血病反应积分明显增高,未经治疗的慢性粒细胞白血病积分明显减低。

2、急性细菌感染积分明显增高,病毒感染积分多正常或减低。

3、再生障碍性贫血积分常增高,PNH、MDS积分常减低。

 

注意事项:

1、血液或骨髓细胞涂片或其他样本均应新鲜,薄厚适宜,及时固定,否则会影响酶的活性。

2、培养细胞染色操作过程中,清洗、染色等步骤都应轻微,以免损伤或丢失细胞。

3ALP孵育液易失效或降低阳性强度,即配即用,不宜久置。

4、复染时,核固红染色液或甲基绿染色液二者取其一。

5、每次染色时,应有阳性对照片

 

有效期:6个月有效。

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