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吖啶橙/溴化乙锭双荧光染色试剂盒
发布时间:2016-04-29   点击次数:687次

产品简介:

细胞凋亡(Apoptosis)的检测方法有形态学、生物化学、DNA片段化检测方法以及TUNEL等标记片段化DNA方法,但从细胞凋亡概念产生的历史及准确性方面考虑,使用显微镜进行的形态学观察也是很重要的。细胞死亡的检测可以通过荧光色素染色区分活细胞、死细胞,测定细胞代谢活性和形态学观察。这些方法都是利用细胞凋亡这种情况进行测定的,因而不一定反映实际情况。MTT法是测定线粒体中特有酶的活性,反映细胞数目的变化,其结果不细胞死亡的数目未必完全一致。

属于三环杂芳香燃料,可以标记DNARNA,属于异染性荧光染料,AO常用于细胞内DNARNA进行检测。AO与核酸结合方式主要有:1、插入性结合,AO嵌入核酸双链的碱基对之间,这种结合方式主要为AODNA的结合,其荧光収射峰为530nm,激发后呈绿色荧光;2、静电吸引,带正电荷的AO与单链核酸的磷酸根(带负电荷)产生静电间的吸引结合,这种结合方式主要为AO RNA的结合,其荧光发射峰为640nm,激发后呈红色荧光,少量结合会呈桔黄色或桔红色荧光。因此,嵌合到双链DNA分子中显绿色,与DNA单链或RNA结合时収橙红色荧。

嵌合到双链DNARNA的碱基对中,无碱基特异性,发红色荧光。可透过活细胞膜,EB不能通过与活细胞膜具有相同通透性的细胞膜。

产品组成

名称/编号

D0839

100T

Storage

试剂(A):AO solution  

200ul

4 避光

试剂(B):EB solution

200ul

RT

试剂(C):AO/EB Dilution Buffer

50ml

4 避光

使用说明书

1

 

自备材料:

1、荧光显微镜

2PBS

3、细胞计数板

4、载玻片、盖玻片

 

操作步骤(仅供参考)

1AO/EB工作液的配制:取试剂(A)、试剂(B)、试剂(C),按照试剂(A):试剂(B):试剂(C)=1:1:8的比例稀释成AO/EB工作液。

2、每份细胞样品中加入AO/EB工作液2μl,混合均匀。

3、低速离心:500g离心5min,弃上清。

4、用 AO/EB Dilution Buffer重悬细胞,细胞计数,将细胞密度调整为0.5~5×106/ml

5、每25μl细胞悬液中,加入1μl AO/EB工作液,充分混匀。

6、取洁净载玻片,滴加上5μl细胞悬液,轻轻盖上盖玻片。

7、在荧光显微镜B域进行观察。

 

染色结果:

活细胞

绿色荧光

死细胞

橙色荧光

注意事项:

1、用能通过活细胞膜与DNA结合发蓝色荧光Hoechist 33342和只能通过死细胞与DNA结合后发红色荧光的碘化吡啶(propidium iodide,PI)对细胞进行双染的方法也比较常用。

2、如有低温离心机进行离心效果更佳。

3、操作过程中应注意减少试剂(A)、试剂(B)暴露于强光下的时间。

4EB solution 有一定毒性,请小心操作。

5、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

有效期:6个月有效。

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