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SYBR Green I(10000×)电泳用
发布时间:2016-04-19   点击次数:839次

是高灵敏的DNA荧光染料,适用于各种电泳分析,操作简单:无须脱色或冲洗。与dsDNA结合荧光信号会增强800-1000倍,用染色的凝胶样品荧光信号强,背景信号低。可适用于多种电泳分析。(的zui低检出限:20pg DNA(254nm);60pg DNA(300nm 紫外透射);此外,还可以用于检测寡核苷酸(1-2ng,300nm 紫外透射),比EB灵敏20至100倍。)适合于多种凝胶电泳方法:琼脂糖凝胶,聚丙烯酰胺凝胶电泳,脉冲电场凝胶电泳,和毛细管电泳等。与双链DNA的亲和力非常高,因此可以用做电泳前染色,对分子生物学中常用的酶(如:Taq酶、逆转录酶、内切酶、T4连接酶等)没有抑制作用。另外,与EB相比,诱变能力大大降低。

核酸染料特点

高灵敏:至少可检出20pg DNA,高于EB染色法25-100倍。

信噪比高:样品荧光信号强,背景信号低。

操作简单:无须脱色或冲洗。

适用范围广:可适用于多种电泳分析。

使用方便:不影响其它修饰酶作用。

安全性高:分子克隆上明确诱变能力很低

使用方法

预染方法

1.       该方法适于琼脂糖凝胶电泳和PAGE凝胶电泳

2。       工作液的配制:用电泳缓冲液将10000×的稀释100倍,即为工作液。工作液可以置2-8℃冷藏一个月以上。

3。       制胶:按常规方法制胶,不含任何染料。

4.       样品染色:向分析样品中加入工作液和载样缓冲液,室温放置10分钟,使与样品中DNA充分结合。工作液加入量为总上样量的1/10。

5.       DNA Marker染色:将5μL DNA Marker和工作液混匀,室温放置5分钟,使与DNA充分结合。(商品Markerzui好稀释2-5倍后再电泳,否则电泳条带会变形,特别是大片段。)

6.       上样、电泳:按常规操作。

SYBR Green I后染方法

1。       按照常规方法进行电泳。

2.       用PH=7.0-8.5的缓冲液(如:TAE,TBE或TE),按照10000:1的比例稀释浓缩液,混匀,制成染色溶液。

3.       将染色溶液倒入合适的聚丙烯容器中,放入凝胶,用铝箔等盖住容器使染料避光。室温振荡染色10-30分钟,染色时间因凝胶浓度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝胶直接在玻璃平皿上染色,将配好的工作溶液轻轻地倒在胶板上,让工作液均匀地覆盖整个胶板,并染色30分钟。玻璃平皿必须预先经过硅烷化溶液处理(避免染料吸附在玻璃表面上)。

4。       用紫外仪观测。

使用注意事项

1.       在"预染色方法"中,电泳时间不要超过2小时,否则会从DNA上分离出来,会产生弥散状条带。

2.       在常规用酒精沉淀核酸的过程中,SYBR Green I可以全部从双链核酸上去掉。

3.       如果想对用  染过的胶进行Southern blots,建议在预杂化和杂化溶液中加入0。1%- 0。3%的SDS。

4.       在紫外照射透视下,与双链DNA接合的呈现绿色荧光。如果胶中含有单链DNA则颜色为橘黄而不是绿色。

5.       对玻璃和非聚丙烯材料具有一定亲合力。建议在稀释、贮存、染色等使用过程中用聚丙烯类容器。

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