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MTT 细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒
发布时间:2016-04-05   点击次数:850次

产品简介:

比色法是一种检测细胞存活和生长的方法 (MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测。MTT检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色Formazan并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。在特定溶剂存在的情况下,可以被完全溶解。然后通过酶标仪可以测定570nm波长附近的吸光度。细胞增殖越多越快,则吸光度越高;细胞毒性越大,则吸光度越低。

NobleRyder 采用了NobleRyder自主研发Formazan solvent,使检测本底低,灵敏度高,线性范围宽。

产品组成

名称/编号

C0290

500T

Storage

/ml)

5mll

-20 避光

试剂(B):Formazan solvent

60ml

RT

使用说明书

1

 

自备材料:

1、细胞培养液

2、胰蛋白酶消化液

3、低速离心机

496孔培养板

5、细胞计数板或计数器

6、细胞培养箱

7、摇床

8、显微镜

9、酶联免疫检测仪

 

操作步骤(仅供参考)

1、细胞用含血清的培养液培养至对数生长期,常规胰蛋白酶消化液消化细胞(悬浮细胞无需消化)。

2、低速离心,收集细胞沉淀。

3、用培养液重悬细胞沉淀,制备成单细胞悬液,并计数。

4、细胞接种于96孔培养板,一般接种密度为300010000个细胞/孔。通常细胞增殖实验每孔加3000个细胞,细胞毒性实验每孔加入6000个细胞。具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定。

537 5%CO2继续培养或按照实验具体需要进行培养,一般培养624h

6、按照实验具体要求,给予020μl干预药物处理,37 5%CO2 继续培养至合适时间。

7、弃培养液,每孔加入10μl l新鲜培养液,在细胞培养箱内继续孵育4h。

8、弃培养液,每孔加入110μl Formazan solvent,置摇床上低速振荡10 min,使结晶物充分溶解。如果紫色结晶较小或较少,溶解的时间会短一些。如果紫色结晶较大或较多,溶解的时间会长一些。

9、在酶联免疫检测仪570nm测定各孔吸光度。

 

注意事项:

1尽量减少反复冻融的次数,当颜色变为灰绿色时,请勿使用。

2、由于使用96孔板进行检测,如果细胞培养时间较长,应注意蒸发问题。

3在低温情况下会凝固,置于室温或2025℃水浴至全部融解后使用。

4Formazan solvent可以-20℃储存,当产生沉淀或凝固时可以37℃水浴孵育以促进溶解,并且必须在全部溶解并混匀后使用。

5、观察formazan是否完全溶解,亦可以借助光学显微镜观察。

6、培养细胞时尽量细菌避免污染。

7、应注意设立OD调零孔和对照。

8、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

有效期:12个月有效。

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