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BCA蛋白浓度测定试剂盒使用说明
发布时间:2016-03-23   点击次数:2768次

使用说明

试剂盒组成

包装(500微孔)

保存

BCA试剂

100ml

2-8

Cu试剂

3ml

2-8

PBS稀释液

30ml

2-8

BSA蛋白标准 (5mg/ml BSA)

1ml

 -20

本试剂盒自订购之日起一年内有效。本试剂盒用于酶标板或者200ul比色皿时可做500孔。当使用2ml比色皿时可做50孔,如果是1ml比色皿时可做100孔。

产品简介

碱性条件下,蛋白将Cu2+还原为Cu+ Cu+BCA试剂形成紫颜色的络合物,测定其在562nm处的吸收值,并与标准曲线对比,即可计算待测蛋白的浓度。常用浓度的去垢剂SDS,Triton X-100Tween不影响检测结果,但受螯合剂(EDTAEGTA)、还原剂(DTT,巯基乙醇)和脂类的影响。实验中,若发现样品稀释液或裂解液本身背景值较高,可试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。

使用说明

一,微孔酶标仪法

1.         配制工作液根据标准品和样品数量,按50体积BCA试剂加1体积Cu试剂(50:1)配制成BCA工作液,充分混匀(混合时可能会有浑浊,但混匀后就会消失)BCA工作液室温24小时内稳定。

2。         稀释标准品:取10微升BSA标准品用PBS稀释至100微升(样品一般可用PBS稀释),使终浓度为0.5mg/ml。将标准品按0, 2, 468, 12, 16, 20微升加到96孔板的蛋白标准品孔中,加PBS补足到20微升。

3.         将样品作适当稀释(zui好多做几个梯度,如作2倍、4倍、8倍稀释),加20微升到96孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差,标准线前面的点可能不很准确,所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。

4.         各孔加入200微升BCA工作液,37放置15-30分钟。用酶标仪测定A562nm,根据标准曲线计算出蛋白浓度。使用温箱孵育时,应注意防止因水分蒸发影响检测结果。

 二,分光光度计法

如没有酶标仪,可用分光光度计在离心管中混匀后加入比色皿中比色。

步骤如下:

1.配制工作液根据标准品和样品数量,按50体积BCA试剂加1体积Cu试剂(50:1)配制成BCA工作液,充分混匀(混合时可能会有浑浊,但混匀后就会消失)。BCA工作液室温24小时内稳定。

2,  稀释标准品:取100微升BSA标准品用PBS稀释至1ml(样品一般可用PBS稀释),使终浓度为0。5mg/ml。

3  取八支(或者更多)5ml离心管,标让号,按下表加入试剂。

离心管号

1

2

3

4

5

6

7(样品管1

8(样品管2

9(样品管3

标准蛋白BSA

0

40ul

80ul

120ul

160ul

200ul

200ul适当稀释的样品1

样品2

……

PBS

200ul

160ul

120ul

80ul

40ul

0

0

0

0

BCA工作液

2ml

2ml

2ml

2ml

2ml

2ml

2ml

2ml

 

4  37放置15-30分钟。用分光光度计测562nm处吸光值,根据标准曲线计算出蛋白浓度。

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