技术文章
当前位置:IGE赛车机器人 > 技术文章 >
罗氏蛋白酶K的广泛应用及保存
发布时间:2015-08-26   点击次数:967次
   罗氏蛋白酶K是一种用途广泛的非特异性的丝氨酸蛋白酶。在pH 4到pH 12的条件下均有活性,在SDS、尿素或EDTA存在时亦很稳定。罗氏蛋白酶K常用于提取mRNA、基因组DNA,或用于从各种细胞中提纯DNA和RNA时消化杂蛋白。还可用于糖蛋白的修饰,以及蛋白质结构研究等方面。

  罗氏蛋白酶K的应用比较广泛,它可以消化包围靶DNA蛋白,因此使用罗氏蛋白酶K能够增加探针与靶核酸结合的机会增强杂交信号,但在使用罗氏蛋白酶K时要注意使用的浓度,过高或者过低都会破坏细胞的结构、核消失等影响试验结果。

  罗氏蛋白酶K的作用:

  蛋白酶K在原位杂交技术中通常用于杂交前的处理,它具有消化包围靶DNA蛋白质的作用,以增加探针与靶核酸结合的机会,提高杂交信号。但蛋白酶K的浓度过高、消化时间过长或孵育温度过高时,都会对细胞的结构有一定的破坏,导致组织切片的脱落,细胞核的消失,从而影响杂交结果。EDTA缓冲液可以替代蛋白酶K的作用,解决上述出现的问题,并能达到理想的染色效果。

  罗氏蛋白酶K的配制和保存

  推荐反应缓冲液:50mM Tris-HCl (pH7.5),10mM CaCl2。

  蛋白酶k配制标准:20mg/ml蛋白酶K配制标准(proteinase K):将200mg的蛋白酶K加入到9.5ml水中,轻轻摇动,直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。

  罗氏蛋白酶K的保存:保存在-20℃冰箱里,避免反复冻融,有效保证12月。孵育温度为55至65℃,理想孵育温度为58℃,孵育时间为15分钟至48小时;理想孵育时间为2小时。

北京诺博莱德科技IGE赛车机器人版权所有   |      GoogleSitemap
北京诺博莱德科技IGE赛车机器人(www.shopitat.com)主营产品:Qiagen试剂盒,MPbio土壤提取试剂,merck-millipore试剂,罗氏蛋白酶K,cst抗体到货快
电话:
010-62817090
  • 点击这里给我发消息
  • 点击这里给我发消息
  • 点击这里给我发消息

推荐收藏该企业网站
秒速牛牛计划 秒速牛牛技巧 秒速牛牛是骗局吗 荣鼎彩平台 秒速牛牛攻略 荣鼎国际 吉林快三机器人 秒速牛牛注册 秒速牛牛计划平台 广东11选5机器人
扫一扫访问手机站扫一扫访问手机站
访问手机站