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血清蛋白电泳操作步骤及注意
发布时间:2014-04-21   点击次数:2137次
   在碱性环境里,血清蛋白皆带阴电荷,在电场中向阳极泳动,因各蛋白质等电点和分子量有差异,分子量小、阴电荷多泳动zui快;分子量大、阴电荷较少者泳动较慢。电泳后,从阳极开始,依次为白蛋白、a1球蛋白、a2球蛋白、β球蛋白和γ球蛋白五个区带。
  血清蛋白电泳操作步骤
  ㈠ 开机,启动电泳仪。
  ㈡ 将1个(用于7 PROTEIN或用于15 RPOTEIN)或2个(用于30 PROTEIN)加样梳置于平板上,有数字的一端向上,在2分钟内完成每块加样梳的加样,每孔加10ul样品,然后齿梳向上把加样梳放于湿盒内5分钟。
  ㈢ 选择相应的电泳程序,使用HYDRAGEL 7 PROTEIN(E)时选择仪器的“PROTEIN 7”电泳程序,使用HYDRAGEL 15/30 PROTEIN(E)时选择仪器的“PROTEIN 15/30”程序。 ㈣ 从包装袋内取出缓冲条,将其固定在电极支架背侧的钉上,再取出凝胶,用薄滤纸快速轻轻地吸去凝胶表面多余的液体,在温控板表面下1/3处加120 l[HYDRAGEL 7 PROTEIN(E)]或200ul[HYDRAGEL 15 PROTEIN(E)]蒸馏水或去离子水,将凝胶片底边紧靠框架底边,边缘对齐边线,略弯曲凝胶片慢慢放平,注意凝胶片下面勿出现气泡。
  ㈤ 自然放下支架,从湿盒中取出加样梳并去除齿梳下的保护支架,7和15个样品分析的加样梳置于支架6号位,30个样品分析的加样梳则分别置于3号和9号位,注意点样梳上的数字必须面对操作者,关上电泳舱盖,按下键盘左侧的绿色箭头“START”键,电泳开始,确保仪器右侧的空气通道不被堵塞。
  ㈥ 电泳仪自动发出蜂鸣声,提示电泳结束,打开电泳盖,将加样梳和缓冲条丢弃,取出已烘干的胶片,用湿纸巾擦拭电极和温控板,将胶片固定于凝胶支架上放入染色空间中,在检查染色液瓶内是否有300ml染色液,脱色液瓶内是否有1000ml脱色液以及是否排空了废液瓶后,选择“PROT./B1-B2/Hb”染色程序并按“start”键开始染色。
  ㈦ 在染色、脱色以及干燥步骤完成后,电泳仪自动发出蜂鸣声,取出凝胶支架,将烘干的胶片用光密度仪进行扫描,若希望胶片背景更加清晰,在进行扫描前可以额外增加一个冲洗步骤,程序为“WASH ISOENZ/GEL”。 ㈧ 关机,在电脑系统上对扫描结果进行分析。
  血清蛋白电泳操作注意事项
  ㈠为达到zui佳检测效果,同一试剂盒内的所有组分必须一并使用。
  ㈡氨基黑染液的配制必须按照试剂盒内使用说明配置,否则会降低蛋白片段的检测效果。
  ㈢用薄滤纸吸去凝胶表面多余液体时,接触时间不能太长,应快速移去,以免凝胶脱水。
  ㈣注意先挂缓冲条再放凝胶片,缓冲条取出时应均匀挤捏使缓冲液能分布均匀。
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