技术文章
当前位置:IGE赛车机器人 > 技术文章 >
琼脂糖凝胶电泳的方法
发布时间:2019-06-18   点击次数:400次
   琼脂糖凝胶电泳的方法

  ① 凝胶类型

  用于分离核酸的琼脂糖凝胶电泳可分为垂直型及水平型(平板型)。水平型电泳时,凝胶板完全浸泡在电极缓冲液下1-2mm,故又称为潜水式。目前更多用的是后者,因为它制胶和加样比较方便,电泳槽简单,易于制作,又可以根据需要制备不同规格的凝胶板,节约凝胶,因而较受欢迎。

  ② 缓冲液系统

  缺少离子时,电流太小,DNA迁移慢;相反,高离子强度的缓冲液由于电流太大会大量产热,严重时,会造成胶熔化和DNA的变性。

  常用的电泳缓冲液有EDTA(pH8.0)和Tris-乙酸(TEA),Tris-硼酸(TBE)或Tris-磷酸(TPE)等,浓度约为50mmol/L(pH7.5~7.8)。电泳缓冲液一般都配制成浓的贮备液,临用时稀释到所需倍数。

  TAE缓冲能力较低,后两者有足够高的缓冲能力,因此更常用。TBE浓溶液长期贮存会出现沉淀,为避免此缺点,室温下贮存5×溶液,用时稀释10倍0.5×工作溶液即能提供足够缓冲能力。

  ③ 凝胶的制备

  以稀释的电极缓冲液为溶剂,用沸水浴或微波炉配制一定浓度的溶胶,灌入水平胶框或垂直胶膜,插入梳子,自然冷却。

  ④ 样品配制与加样

  DNA样品用适量Tris-EDTA缓冲液溶解,缓冲液内含有0.25%溴酚蓝或其他指示染料,含有10%-15%蔗糖或5%~10%甘油,以增加其比重,使样品集中。为避免蔗糖或甘油可能使电泳结果产生U形条带,可改用2.5%Ficoll(聚蔗糖)代替蔗糖或甘油。

  ⑤ 电泳

  琼脂糖凝胶分离大分子DNA实验条件的研究结果表明,在低浓度、低电压下,分离效果较好。在低电压条件下,线性DNA分子的电泳迁移率与所用的电压呈正比。但是,在电场强度增加时,较大的DNA片段迁移率的增加相对较小。因此随着电压的增高,电泳分辨率反而下降,为了获得电泳分离DNA片段的最大分辨率,电场强度不宜高于5V/cm。

  电泳系统的温度对于DNA在琼脂糖凝胶中的电泳行为没有显著的影响。通常在室温下进行电泳,只有当凝胶浓度低于0。5%时,为增加凝胶硬度,可在4℃进行电泳。

  ⑥ 染色和拍照

  常用荧光染料溴乙锭(EB)染色,在紫外光下观察DNA条带,用紫外分析仪拍照,或用凝胶成像系统输出照片,并进行有关的数据分析

北京诺博莱德科技IGE赛车机器人版权所有   |      GoogleSitemap
北京诺博莱德科技IGE赛车机器人(www.shopitat.com)主营产品:Qiagen试剂盒,MPbio土壤提取试剂,merck-millipore试剂,罗氏蛋白酶K,cst抗体到货快
电话:
010-62817090
  • 点击这里给我发消息
  • 点击这里给我发消息
  • 点击这里给我发消息

推荐收藏该企业网站
足彩单场网上投注 北京28预测 荣鼎彩开户 北京赛车机器人 荣鼎彩注册 秒速牛牛计划 荣鼎国际 荣鼎国际 秒速牛牛官网 北京28预测
扫一扫访问手机站扫一扫访问手机站
访问手机站