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如何使用QIAGEN 试剂盒提取DNA
发布时间:2017-11-14   点击次数:1014次
   QIAGEN 试剂盒提取DNA步骤

  缓冲液AP1和AP3/E可能在储藏过程中沉淀,使用前检查,必要时65摄氏度预热溶解(注意加完乙醇后就不能再加热)

  缓冲液APW和AP3/E*次使用时要加入适量乙醇(96%-100%)

  1. 研磨前擦拭工作台。

  2。 研钵里加入液氮,预冷。研磨材料,加3-5次材料,充分研磨。液氮预冷离心管后加入材料,加至1/2或2/3处。若暂时不加缓冲液,就放入至液氮冷冻,用时拿出。拿出后立即轻轻开盖,防止材料喷出。

  3. 加入440μl 缓冲液AP1(必须为预热好的),。盖好后使劲颠倒混匀材料和缓冲液。

  4. 加4μlRNase 后,剧烈涡旋,使管底的材料也与液体混合。

  5. 将混合物在65摄氏度下温浴15min,每5min中上下轻轻颠倒试管2-3次。准备冰盒。加入130μl 缓冲液AP2,上下颠倒混匀,在冰上放置5Min。14000rpm/min离心5min.仔细缓慢将上层液体(500μl )置于QIAshredder Mini Spin Colum (柱)中(紫色)。14000rpm/min离心2min.

  6. 将上步中的滤液(450μl )缓慢吸至一新的离心管(自己准备的Axygen 离心管)中,注意别吸到管底细胞碎片小球。

  7. 在溶解清液中仔细缓慢加入1.5倍体积(675μl )的缓冲液AP3/E。一定要仔细,慢慢抽吸至两者充分混匀。

  8. 将上步中650μl 混合液(包括形成的沉淀)加入Dneasy Mini Spin Colum (柱)中(白色),其余的混合液留着,用于再次抽提。≥8000rpm/min(一般用14000rpm/min)离心1Min ,丢弃废液。准备灭菌的去离子水于65摄氏度水浴锅中预热。

  9. 剩余的混合液继续加入上一步的Dneasy Mini Spin Colum (柱)中,≥8000rpm/min(一般用14000rpm/min)离心1Min ,丢弃废液和收集管。

  10. 将Dneasy Mini Spin Colum(柱)下置QIAGEN 试剂盒提供的2ml 离心管(取时手不要伸进去,隔着塑封袋捏出离心管)。加入500μl 缓冲液A W ,放置3-5min ,≥8000rpm/min(一般用14000rpm/min)离心1Min, 丢弃废液,收集管再用一次。

  11. Dneasy Mini Spin Colum (柱)中加入500μl 缓冲液A W ,放置3-5min ,14000rpm/min离心3Min, 丢弃废液, 收集管再用一次。

  12. Dneasy Mini Spin Colum(柱)中加入500μl 无水乙醇,放置3-5min ,14000rpm/min离心3Min, 丢弃废液和收集管

  13。 在Dneasy Mini Spin Colum(柱)下置1。5或2ml 离心管(自己准备的Axygen 离心管),吸取100μl 灭菌的去离子水(必须为预热的)加到Dneasy 膜上。65摄氏度水浴5min 。≥8000rpm/min(一般用14000rpm/min)离心1min 洗提DNA 。

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