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abcam抗体的修复和纯化方法介绍
发布时间:2016-12-09   点击次数:932次
   abcam抗体的修复方法

  1、沸水浴修复,将盛有修复液和玻片的烧杯置于沸水浴环境,保持外部沸腾状态15min,自然冷却至室温;

  2、微波修复,将盛有修复液和玻片的烧杯置于微波炉中,高火5min,停火3min,中火5min,自然冷却至室温。

  abcam抗体的纯化方法

  多克隆抗血清或单克隆腹水/组织培养上清通常通过下述三种方法中的一种来进行纯化:

  1.蛋白 A/G 纯化

  蛋白 A/G 纯化是应用金黄色葡萄球菌的蛋白 A 或链球菌的蛋白 G 对免疫球蛋白 Fc 段的高亲和性。蛋白 A/G 纯化从粗制抗血清中去除了血清蛋白,但没有去除非特异的免疫球蛋白组分。结果蛋白 A/G 纯化的抗血清仍然具有一小部分不期待的交叉反应性。

  2.亲和纯化

  亲和纯化是通过相似性分离某一特定蛋白或具有相似特征的一组蛋白。这种分离蛋白的技术是基于在蛋白和耦合于层析介质上的特定配基之间的一种可逆的相互作用。

  抗原亲和纯化是利用免疫球蛋白能够特异性地同刺激它产生的抗原进行结合的特点,消除了大量的非特异免疫球蛋白成分,把与目标抗原特异结合的免疫求蛋白富集。因此亲和纯化后获得的主要是含目标特异性免疫球蛋白。

  3.前吸收

  多克隆抗体有时要经过前吸收。也就是说它们要被不同物种来源的其它蛋白或血清吸收,以消除可能的交叉反应的抗体。这样纯化后的抗体纯度和特异性都很高,任何交叉反应都被显著减少。

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